Freies T3 und freies T4 sind die hormonell wirksamen Fraktionen der Hormone. Sie sind weitgegend unabhängig von der Konzentration der Trägerproteine. Gesonderte Referenzbereiche für Kinder siehe Anhang.

Sehr hohe Biotinkonzentrationen welche durch Supplementierung mit Biotin (Vitamin B7) erreicht werden können zu Interferenzen in Immunoassays mit Streptavidin-Biotin-Komlexen führen. Physiologische Biotinkonzentrationen im Plasma liegen bei 0,12-0,54 ng/ml. Nach Substitution von entsprechenden Biotinpräparaten können diese auf das 100-fache und höher ansteigen.
Beim FT3-Assay können ab einer Biotinkonzentration von 50 ng/ml die FT3-Werte um 10% ab einer Biotinkonzentration von 100ng/ml um ca. 20% ansteigen.